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『维真生物』光遗传_化学遗传_钙成像_神经递质探针现货供应
发布:2024-07-24 12:54:06 浏览:

  化学遗传学是用遗传学方法对一些生物大分子进行改造,使其能和先前无法识别的小分子进行相互作用,从而调控神经细胞的活动,例如DREADDs(designer receptors exclusively activated by designer drugs,只由特定药物激活的受体)。

  DREADDs是一种基于G蛋白偶联受体所改造的化学遗传学平台,通过将不同的G蛋白偶联受体进行改造,让它能传递人工合成的蛋白质,修改后的受体只能由人工合成的特殊化合物来激活或者抑制,并激活相应的GPCR信号通路,从而引发细胞不同的兴奋性变化。

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  其中,由氯氮平N氧化物(clozapine-N-oxide,CNO)激活的D米乐 登录入口READDs,能选择性地作用于不同的GPCR级联反应,包括激活Gq、Gi、Gs、Golf和β-arrestin,其中Gq-DREADD和Gi-DREADD应用较为广泛。

  在正常生理条件下,人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(hM3)能与内源性神经递质乙酰胆碱(Ach)结合,然后与Gq类的G蛋白偶联受体耦合,参与Gq类信号通路。人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M4(hM4)与乙酰胆碱(Ach)结合后与Gi类的G蛋白偶联受体耦合发挥作用,参与Gi类信号通路。

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  然而,当将hM3与hM4上的两个保守位点A5.46G和Y3.33C突变后(上图中红色叉号表示),两者均不再与乙酰胆碱结合,而是能与外源添加的CNO高效结合。在CNO刺激下,HM3Dq起到激发神经元的作用,hM4Di则导致神经元的抑制。我们把突变之后的受体称之为hM3Dq和hM4Di。

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  DREADD基因靶向常见的两种策略为病毒注射和转基因动物模型。目前已开发出携带DREA米乐M6 米乐平台DD转基因的重组AAV载体,通过添加细胞特异性启动子,配合立体定位注射的方法,实现DREADD基因在不同组织细胞内的精准表达,利用CRE、FLP等技术,进一步实现基因的条件可控性表达,如当您有CRE的转基因动物时,可直接利用携带DREADD转基因的DIO米乐 登录入口载体。此外,科研工作者还可利用一些特殊的米乐M6 米乐平台AAV血清型,实现病毒的逆向或跨神经突触的感染。